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靶点及简介 ：P110α inhibitor

A66是一种有效的，特异性的p110α抑制剂，IC50为32 nM，作用于p110α比作用于其他I型PI3K亚型选择性高100倍以上。

体外研究：

    A66是p110α的野生型和致癌形式的有效抑制剂,但不是其他I类PI3K同种型[1]。 p110α特异性抑制剂A66(0.7μM)通过高度转化的iSH2突变体KS459delN,DKRMNS560del和K379E诱导焦点形成减少75-80％。 p110α特异性抑制剂A66通过所有p85突变体降低了T308上Akt的磷酸化[2]。

体内研究

    通过在CD-1小鼠中通过腹膜内注射剂量10mg/kg体重后研究药物药代动力学来确定异种移植研究的最佳给药策略。尽管短半衰期仅为0.42小时,但在给药后30分钟达到的A66 S的大Cmax(8247 nM)确保了AUC0-inf(从零时间到无穷大的曲线下面积)(6809 nM•h) )类似于BEZ-235(7333 nM•h),其半衰期较长,为2.73小时。此外,使用单剂量100mg/kg体重测试SK-OV-3肿瘤组织上的A66,以确定是否可以在靶组织上实现药物的长效作用。这些研究表明A66在给药后1小时和6小时引起Akt/PKB和p70 S6激酶的磷酸化显着降低,但不导致ERK(细胞外信号调节激酶)的磷酸化。在药物注射后1小时和6小时,血浆中A66的水平被确定为21.1±1.2μM和9.1±1.1μM,而在相同时间点,肿瘤中A66的水平为22.7±2.1μM和16.0±1.3μM[ 1]。

激酶实验

    使用PI3K（人）HTRF测定评估IC 50值。 p85α/p110δ从Invitrogen获得。所有其他同种型通过共表达全长人p85α与指定的人全长催化亚基在内部产生，所述人全长催化亚基在N-末端含有组氨酸标签以允许纯化。滴定PI3K并以其EC65-EC80值之间的浓度使用。使用针对p85α的N-SH2（N-Src同源性2）结构域的抗体测定免疫沉淀物中的PI3K活性。其他脂质激酶和蛋白激酶的测定由National Center for Protein Kinase Profiling and Invitrogen Drug Discovery Services [1]进行。

动物实验

    小鼠[1]年龄匹配的无特定病原体的Rag1 - / - 或NIH-III小鼠在右侧皮下接种PBS中的5×106U87MG，SK-OV-3或HCT-116细胞。通过电子卡尺测量的肿瘤直径用于基于公式（L×w2）×π/ 6（其中L =最长肿瘤直径和w =垂直直径）计算肿瘤体积（mm 3）。 A66在水中的20％2-羟丙基-β-环糊精中给药，而BEZ-235在10％乙醇中给药。对照小鼠单独给予A66给药载体。通过腹膜内注射给药作为游离碱当量，剂量为10mL / kg体重。对于肿瘤药效学研究，当肿瘤直径达到约8-9mm时，给予小鼠单剂量的A66或对照载体。在给药后1或6小时杀死动物并取出肿瘤，进行生物过滤并测定蛋白质浓度。对于抗肿瘤效力研究，当肿瘤建立良好时开始给药，平均直径约7mm。剂量每日一次（QD）或每日两次（BID），注射间隔最少约8小时。根据肿瘤生长速率和对照小鼠的体重耐受性，将不同的给药方案用于三种异种移植模型。动物每天给药21天或每天两次，持续16天（SK-OV-3），每天给药14天（U87MG），每天给药7天（HCT-116）。每天监测动物的任何新出现的毒性迹象并记录体重。如果小鼠出现中度毒性迹象或体重减轻超过起始体重的20％，则将其杀死。通过将药物处理的小鼠的相对肿瘤大小确定为对照小鼠的平均相对肿瘤大小的百分比，在给药的最后一天计算TGI（肿瘤生长抑制）。 TGI值的统计显着性通过使用GraphPad Prism 5.02的Bonferroni多重比较分析的单向ANOVA确定。

参考文献：

• [1] Jamieson S, et al. Biochem J, 2011, 438(1), 53-62.
• [2] Sun M, et al. Proc Natl Acad Sci U S A, 2010, 107(35), 15547-15552.
• [3] Smith GC, et al. Biochem J, 2012, 442(1), 161-169

• 溶解度及制备方案

DMSO	79 mg/mL (200.75 mM)
Ethanol	1 mg/mL (2.54 mM)
Water	Insoluble

制备储备液

浓度   溶剂体积    质量	1 mg	5 mg	10 mg
1 mM	2.5411 mL	12.7055 mL	25.4110 mL
5 mM	0.5082 mL	2.5411 mL	5.0822 mL
10 mM	0.2541 mL	1.2706 mL	2.5411 mL
50 mM	0.0508 mL	0.2541 mL	0.5082 mL

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