本SOP规范盐酸安罗替尼(CAS 1360460-82-7)在细胞实验中的配制与使用,强调禁用PBS、须用生理盐水稀释,提供储备液配制、浓度换算、给药及检测全流程操作要点。

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Anlotinib (AL3818) Dihydrochloride —— 安罗替尼(ALTN)盐酸盐:标准操作规程(SOP)及实验流程

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盐酸安罗替尼(Anlotinib dihydrochloride)实验方法步骤SOP

Anlotinib (AL3818) dihydrochloride ,安罗替尼(CAS#1360460-82-7 目录号D808726 请使用生理盐水而非PBS进行稀释,因为PBS可能导致沉淀。)

说明:本SOP基于安罗替尼产品信息(CAS:1360460-82-7)及相关文献制定,适用于体外细胞实验与体内动物实验,仅限科研使用,严禁用于人体及动物治疗。

一、基础信息(快速查阅)

项目

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CAS号

1360460-82-7

化学式/分子量

C₂₃H₂₄Cl₂FN₃O₃ / 480.36

纯度

>99.5%

溶解度

DMSO 48 mg/mL;Water 96 mg/mL;严禁用PBS稀释,易产生沉淀,必须用生理盐水

靶点

VEGFR、PDGFR、FGFR、c-Kit(对VEGFR2抑制IC50=0.2 nM)

储存条件

粉末-20℃可稳定3年;溶液-80℃可保存1年,避光、避免反复冻融

二、细胞实验操作流程

1. 试剂配制(核心注意事项)

1. 储备液配制:用DMSO配制成10 mM储备液,涡旋充分溶解,瞬时离心,分装(10–50 μL/管),-20℃避光保存。

2. 工作液配制:用生理盐水稀释储备液,再用完全培养基调至所需浓度,现配现用,全程禁止使用PBS。

3. 对照组设置:溶剂对照组DMSO终浓度与药物组一致,≤0.1%。

2. 配液浓度换算表

目标浓度

1 mg所需溶剂

5 mg所需溶剂

10 mg所需溶剂

1 mM

2.08 mL

10.41 mL

20.82 mL

5 mM

0.42 mL

2.08 mL

4.16 mL

10 mM

0.21 mL

1.04 mL

2.08 mL

50 mM

0.04 mL

0.21 mL

0.42 mL

3. 细胞培养与给药

1. 细胞选择:高表达VEGFR/PDGFR/FGFR的肿瘤细胞(A549、NCI-H226、SK-OV-3、SW-620、7721等)。

2. 常规培养:含10% FBS的DMEM/RPMI-1640,37℃、5% CO₂。

3. 接种:96孔板3000–8000个/孔,贴壁12–24 h。

4. 给药:设置0.01、0.1、1、5、10 μM浓度梯度,每组3复孔,孵育48–72 h。

4. 检测方法与记录

检测指标

检测方法

操作要点

细胞增殖/活力

CCK-8/MTT

450 nm测OD,计算抑制率与IC50

细胞凋亡

Annexin V-FITC/PI流式

避光处理,上机检测

信号通路抑制

Western blot

检测p-VEGFR2、p-PDGFRβ、p-ERK、p-AKT

克隆形成

结晶紫染色

给药10–14 d,计数克隆数

迁移/侵袭

Transwell

计数穿膜细胞数

三、动物实验操作流程

1. 动物与模型准备

动物:SPF级裸鼠、C57BL/6小鼠、SD大鼠;体重18–22 g,雌雄各半。

模型:人源肿瘤皮下异种移植瘤(肺癌、卵巢癌、结肠癌、肾癌、胶质瘤等)。

伦理:遵循IACUC规范,适应环境3–5 d,肿瘤体积达100–200 mm³开始给药。

2. 给药方案

1. 配制:用生理盐水溶解,禁止添加PBS,现配现用。

2. 剂量:1.5–6 mg/kg,口服灌胃(i.g.),每日1次。

3. 周期:连续21–28 d,观察肿瘤生长与动物状态。

3. 给药日历模板

实验天数

剂量(mg/kg)

途径

体重(g)

肿瘤体积(mm³)

备注

Day 1

i.g.

Day 2

i.g.

Day 3

i.g.

Day 4–7

i.g.

Day 8–28

i.g.

4. 观测指标与终点

1. 日常监测:每日记录体重、精神、饮食,体重下降>10%需暂停给药。

2. 肿瘤测量:每2–3 d测长径a、短径b,体积V = a×b²/2。

3. 终点取材:脱颈处死,剥离肿瘤,称重、拍照,做Western blot、IHC(Ki-67、CD31、p-VEGFR2)。

4. 关键结果:有效剂量显著抑制肿瘤生长,抑瘤率>60%,动物耐受良好。

四、安全与合规提醒

1. 仅限体外细胞与动物科研,严禁临床/人体/动物治疗使用。

2. 全程禁止用PBS稀释,必须用生理盐水,防止沉淀。

3. DMSO操作在通风橱进行,佩戴防护用具,避免接触与吸入。

4. 药物储存严格-20℃避光,储备液避免反复冻融。

5. 动物灌胃控制体积与速度,防止误吸;废弃物按危化品处理。

五、应急与技术支持

产品咨询/技术支持:全国免费电话400-168-1698;邮箱info@DKM.cn

(注:* 上述方法来自公开文献,仅供相同目的实验参考。如实验目的、材料、方法不同,请参考其他文献。

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