Ulixertinib (BVD-523)：一种高选择性ERK1/2通路抑制剂及其在基础与转化研究中的广泛用途
- 生物活性
靶点及简介 ：reversible ERK1/2 inhibitor
VRT752271 (BVD-523, Ulixertinib) 是一种可口服、高度选择性、ATP竞争性、可逆的 ERK1/2 抑制剂，其抑制ERK2的IC50<0.3 nM。
体外研究
Ulixertinib(VRT752271)是一种可逆的ATP竞争性ERK1和ERK2激酶抑制剂,对ERK2的IC50 <0.3 nM [2]。
体内研究
在药代动力学研究中,发现该测定的灵敏度和特异性足以准确表征Ulixertinib在Balb/C小鼠中的血浆药代动力学[1]。
激酶实验
使用ADP Glo Kinase Assay试剂盒进行MEK自磷酸化测定。活化的MEK蛋白在内部表达和纯化。在由50mM Tris（pH 7.5），10mM MgCl 2,0.1mM EGTA，10mM DTT和0.01％吐温20组成的测定缓冲液中制备酶和底物溶液。在测定缓冲液中制备6nM MEK蛋白质并分配2μL进入含有测试和参照对照化合物的384孔白色小体积培养基结合板的每个孔中。向化合物板给药12点剂量响应曲线，从10μM降至0.0625nM，以计算化合物IC 50，测定中的总DMSO浓度为1％。在室温下将酶和化合物预孵育15分钟后，向孔中加入2μL在测定缓冲液中的20μMUltraPure ATP溶液，并且在添加之前使反应在室温下进行90分钟。用4μLADPGlo试剂R1淬灭反应。将板在室温下孵育45分钟，然后加入8μL激酶检测试剂，然后使发光信号平衡60分钟，然后在Pherastar读板仪上读板。
细胞实验
在由DMEM，10％（v / v）胎牛血清和1％（v / v）L-谷氨酰胺组成的细胞培养基中培养A375细胞。收获后，将细胞分配到黑色的384孔Costar平板中，在总体积为40μL的细胞培养基中每孔产生200个细胞，并在37℃，90％相对湿度和5％CO 2下旋转过夜。孵化器。将测试化合物和参考对照物直接加入细胞板中，加入内部308孔中。将细胞在从30μM至0.03nM的12个点范围内给药，以计算化合物IC50，测定中的总DMSO浓度为0.3％。然后将细胞板在37℃下温育72小时。将细胞固定并通过加入20μL12％甲醛的PBS / A（4％终浓度）和1：2000稀释的Hoechst 33342，室温孵育30分钟进行染色，然后用PBS / A洗涤。使用Cellomics ArrayScanTM VTI成像平台对染色的细胞板进行细胞计数。还将第0天细胞板固定，染色并读取以产生细胞计数基线，用于确定化合物细胞毒性作用以及抗增殖作用。
- 验证及参考文献
验证：
参考文献：
- 溶解度及制备方案
关键词：优立替尼，Ulixertinib (BVD-523), VRT752271; BVD523, Ulixertinib, Ulixertinib (BVD-523)供应商, ERK抑制剂, 购买Ulixertinib (BVD-523), Ulixertinib (BVD-523)溶解度, Ulixertinib (BVD-523)结构式
| 浓度/溶剂体积/质量 | 1 mg | 5 mg | 10 mg |
|---|---|---|---|
| 1 mM | 2.3077 mL | 11.5386 mL | 23.0771 mL |
| 5 mM | 0.4615 mL | 2.3077 mL | 4.6154 mL |
| 10 mM | 0.2308 mL | 1.1539 mL | 2.3077 mL |
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